产品介绍：

胶原酶Ⅰ（CAS NO.9001-12-1）是一种蛋白水解酶，常用来消化细胞外基质蛋白。作为一种肽链内切酶，胶原酶特异性识别pro-X-Gly-Pro序列并切割氨基酸（X）和氨基酸（Gly）之间的肽键，胶原酶是唯一一种可识别并降解具三股超螺旋结构的天然胶原纤维，这种胶原纤维广泛存在于结缔组织中。

保存说明：

-20℃避光保存，一年有效。

使用说明：

a. 储存液制备:

1) 直接往100mg胶原酶内加入100ul含钙镁的HBSS缓冲液，轻轻旋涡震荡确保完全溶解混匀。

2) 根据具体批次的酶活力，用含钙镁的HBSS缓冲液调整酶浓度到100U/ul（1000X储存液），之后用低蛋白吸附滤膜过滤除菌。

3) 立即使用或将储存液根据单位用量分装，置于-20℃避光保存。

4) 使用前置于冰上融化，避免反复冻融。建议胶原酶的工作浓度范围50-100U/ml（或0.5-2.5mg/ml）具体使用浓度请根据消化对象或参考文献来调整。

b. 组织分离:

1) 用无菌手术刀或剪刀将组织切成3-4mm小片，之后用含钙镁的HBSS缓冲液清洗组织片几次。

2) 加足量含钙镁的HBSS缓冲液浸没组织片，之后按照50-200U/ml用量加入适量胶原酶。

3) 37℃孵育4-18h，置于水平摇床并且孵育系统加入3mM CaCl₂ 可提高消化效率。

4) 将消化好的细胞混合物用无菌的不锈钢或尼龙网过滤。残留组织可再添加适量新鲜胶原酶工作液于37℃孵育以进一步解离。

5) 将过筛收集到的细胞用不含胶原酶的HBSS缓冲液清洗几遍。

6) 低速离心，吸去清洗液，最后用适当的细胞培养液重悬细胞，进行活细胞数检测。

c. 器官灌注：

1) 将胶原酶加入37℃预热含钙镁的HBSS缓冲液，使其浓度为50-200U/ml，或根据具体实验体系调整，另外加入3mM CaCl₂ 可提高消化效率

2) 按照针对特定器官的预优化频率进行灌注

3) 将收集到的细胞/组织混合碎片用无菌的不锈钢或尼龙网过滤。残留组织可再添加适量新鲜胶原酶工作液于37℃孵育以进一步解离。

4) 将过筛收集到的细胞用不含胶原酶的HBSS缓冲液清洗几遍。

5) 低速离心，吸去清洗液，最后用适当的细胞培养液重悬细胞，进行活细胞数检测。

注意事项：

1. 本产品仅限于专业人员的科学研究用，不得用于临床诊断或治疗，不得用于食品或药品，不得存放于普通住宅内。

2. 为了您的安全和健康，请穿实验服并戴一次性手套操作。

本产品在文章中的写法：

英文： Dowobio （Shanghai，China）

中文： 上海多沃生物科技有限公司  Dowobio，上海