产品介绍：

Fluo-4 AM是最常用的检测细胞内钙离子浓度的荧光探针之一。分子式为C51H50F2N2O23，分子量为1096.95。

Fluo-4 AM是Fluo-4的乙酰甲酯衍生物，是一种可以穿透细胞膜的荧光染料。Fluo-4 AM的荧光非常弱，其荧光不会随钙离子 浓度升高而增强。Fluo-4 AM进入细胞后可以被细胞内的酯酶剪切形成Fluo-4，从而被滞留在细胞内。Fluo-4可以和钙离子结 合，结合钙离子后可以产生较强的荧光，最大激发波长为494nm，最大发射波长为516nm。实际检测时推荐使用的激发波长 为488nm左右，发射波长为512-520nm。

 用于细胞内钙离子检测时，Fluo-4 AM的常用浓度为0.5-5µM。通常用含有0.5-5µM的Fluo-4 AM的适当溶液和细胞一起在 20-37ºC孵育10-60分钟进行荧光探针装载，随后适当洗涤，洗涤后可以考虑适当再孵育20-30分钟以确保Fluo-4 AM在细胞内 充分转变成Fluo-4。 Ø

本Fluo-4 AM(钙离子荧光探针) 是配制于无水DMSO (anhydrous DMSO)中的储存母液，浓度为2mM。

保存说明：

-20℃避光保存，6个月有效。

使用说明：

1. 取适量Fluo-4 AM母液，用PBS稀释至0.5-5µM的工作液。

注：工作液须即用即配，请勿反复冻融。

2. 对于待检测的培养细胞，去除培养液，用PBS或HBSS洗三遍。

注：因为培养液中的血清含有酯酶会导致Fluo-4 AM分解为Fluo-4，而酚红会导致荧光背景增强。

3. 加入Fluo-4 AM工作液，溶液量以能充分覆盖细胞为准。

4. 20ºC-37ºC孵育10-60分钟进行荧光探针装载。

注：如果是首次实验不能确定孵育温度和时间，建议先尝试37ºC孵育30分钟，观察荧光效果。如果细胞死亡较多，则适当缩短时间或降低温度；如果荧光强度太弱，则适当延长时间。

5. 随后用PBS或HBSS洗涤3次，洗涤后可以考虑适当再孵育20-30分钟以确保Fluo-4 AM在细胞内完全转变成Fluo-4。

6. 如有需要，可以使用适当药物来刺激细胞。

7. 用激光共聚焦显微镜、荧光酶标仪、荧光分光光度计或流式细胞仪等荧光检测仪器检测Fluo-4的荧光，以确定细胞内钙离子浓度的变化

注意事项：

1. 标记的条件因细胞种类而异，在每次实验前，请先确定最佳条件。

2. Fluo-4 AM遇水极易分解，建议第一次使用时，母液分装并密封保存，同时注意保持干燥。

3. Fluo-4 AM在4ºC、冰浴等较低温度情况下会凝固而粘在离心管管底、管壁或管盖内，可以20-25ºC水浴温育片刻至全部融解后使用。

4. 荧光染料均存在淬灭问题，请尽量注意避光，以减缓荧光淬灭。

5. 本产品仅限于专业人员的科学研究用，不得用于临床诊断或治疗，不得用于食品或药品，不得存放于普通住宅内。

6. 为了您的安全和健康，请穿实验服并戴一次性手套操作。

本产品在文章中的写法：

英文： Dowobio （Shanghai，China）

中文： 上海多沃生物科技有限公司  Dowobio，上海