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商品名称:
cDNA第一链合成试剂盒 (去除基因组)
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商品编号:
MI020302
本产品含有反转录反应所需的全部试剂,浓度为5×。反应时,只需加入gDNA Remover、模板RNA和水即可高效地合成第一链cDNA,同时去除RNA模板中残留的基因组DNA。
产品及特点
本产品含有反转录反应所需的全部试剂,浓度为5×。反应时,只需加入gDNA Remover、模板RNA和水即可高效地合成第一链cDNA,同时去除RNA模板中残留的基因组DNA。该产品操作简便,降低操作过程中的污染机率。它具有下列特点:
1.去除gDNA快,只需室温5分钟,就可以实现去除基因组DNA污染。
2.方便快捷:mix配制,组分更少,操作更快;逆转录只需5-10分钟就可以完成。
3.对后续qPCR反应适用性广:通过组分和Buffer优化,使带入到后续qPCR反应的逆转录反应液的影响降到最低。
4.高灵敏度:对极少量的RNA模板也可以进行良好的反转录反应。
成分规格
产品组成
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MI020302-50
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MI020302-100
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10×gDNA Remover
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50 μl
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100 μl
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5×cDNA RT Mix
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200 μl
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400 μl
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DEPC-ddH2O
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1 ml
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1 ml
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保存条件
-20℃保存一年。
使用方法
1.去除基因组:根据以下表格配制反应体系,总体积为10μl。为了保证反应液配制的准确性,先按反应数+2的量配制预混体系,然后再分装到每个反应管中,最后加入RNA。
10×gDNA Remover
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1 μl
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RNA 模板
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0.01~1μg
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DEPC-ddH2O
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补足至10μl
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(注意:如果总RNA量大于1 ug,请按比例扩大反应体系)
将反应液轻轻搅拌均匀,短暂离心使管壁上的溶液收集到管底,室温或25-37℃温育5分钟。
2.反转录反应:在上述反应液中加入4μl 5×cDNA RT Mix,6μl DEPC-ddH2O,轻轻混匀,短暂离心;50℃孵育5-15分钟;85℃加热3分钟使酶失活;置于冰上进行后续实验或冷冻保存。
注意:Real-time qPCR时,作为模板直接稀释后添加(添加到PCR反应液中的反转录稀释液,尽量不要超过20%,以免导致PCR反应效率低下,无法准确定量)