本试剂盒用于高纯度质粒DNA的中量制备。菌体经碱裂解、高盐、低pH处理，质粒可从菌体中释放出来，并特异、高效地被离心吸附柱吸附。

　　产品及特点

      本试剂盒用于高纯度质粒DNA的中量制备。菌体经碱裂解、高盐、低pH处理，质粒可从菌体中释放出来，并特异、高效地被离心吸附柱吸附。通过清洗液的洗涤可去除杂质，在低盐、高pH条件下洗脱，最后得到纯度较高的质粒DNA。使用本试剂盒每次可处理5-15 ml过夜培养的菌液，所得质粒可直接用于酶切、转化、PCR、测序及转染等各种分子生物学实验。它具有下列特点：

　　1.快捷、高效：操作简便，得率高，节约时间；

　　2.纯度高：沉淀致密，去杂干净。

　　成分规格

　　（注意：使用前将全部RNase A溶液加到Buffer S1中混合均匀，2-8℃保存；按要求在Buffer W1和W2中加入无水乙醇）

　　保存条件

　　在室温(15-25℃)干燥条件下，可保存12个月；更长时间的保存可置于2-8℃。若溶液产生沉淀，应在使用前置于37℃下溶解沉淀。加入RNase A后的Buffer S1应置于2-8℃保存，可稳定保存6个月。

　　使用方法

　　柱平衡：向吸附柱中（吸附柱放入收集管中）加入400μl的平衡液BL，12,000 rpm(-13,400×g)离心1 min，弃收集管中滤液，将吸附柱重新放回收集管中。（请使用当天处理过的柱子）

　　1.取5~15 ml过夜培养的菌液，室温12,000 rpm离心1 min，尽量将上清去除干净。

　　（注意：根据菌液的浓度决定取液量，浓度高时取5 ml菌液离心即可，浓度低时可多收集一次）

　　2.加入500μl Buffer S1，旋涡震荡或用移液器充分吹打使菌体重悬均匀。

　　（注意：菌体沉淀一定要悬浮均匀，如有未彻底悬浮的菌块会影响裂解，导致提取的质粒浓度及纯度降低）

　　3.加入500μl Buffer S2，温和颠倒混匀使菌体完全裂解，直到溶液变成清亮、粘稠。

　　（注意：不可剧烈震荡，以免造成基因组DNA片段的污染）

　　4.加入500μl Buffer S4，立即颠倒混匀，可见絮状沉淀物产生，然后12,000 rpm离心5-10 min，将上清液转移到一干净的离心管中，加入500μl异丙醇混匀。

　　（注意：Buffer S4加入后应立即混合，避免产生局部沉淀）

　　5.小心将混合液转移到离心吸附柱中，12,000 rpm离心30 sec，弃收集管中滤液。

　　（注意：吸附柱的最大容量是750μl，要分多次转入）

　　6.向吸附柱中加入500μl Buffer W1，12,000 rpm离心30 sec，弃收集管中滤液。

　　（注意：Buffer W1为浓缩液，按要求加入无水乙醇，用后应立即盖紧瓶盖，以防酒精挥发）

　　7.加入600μl Buffer W2，室温12,000 rpm离心30 sec，弃收集管中滤液。

　　（注意：Buffer W2为浓缩液，按要求加入无水乙醇，用后应立即盖紧瓶盖，以防酒精挥发）

　　8.加入500μl Buffer W2，室温12,000 rpm离心30 sec，弃收集管中滤液。

　　9.干燥。将离心吸附柱于12,000 rpm离心2 min，甩干残留漂洗液。

　　（注意：此步不能省略，否则残留乙醇会影响质粒的后续使用）

　　10.将吸附柱置于一新的无菌1.5 ml离心管（自备）中，加入100-300μl的洗脱液Buffer EB，室温12,000 rpm离心1 min，离心管底溶液即质粒DNA。

　　（注意：为增加洗脱效率，可将洗脱液在60℃预热。如需使用去离子水洗脱，可用NaOH调整其pH值在7.0-8.5之间，为了增加质粒回收率，可将得到的溶液重新加入到离心管中，室温放置2 min，再次离心收集）

　　注意事项

　　细菌培养时间一般为12-16小时，如接种量大则应减少培养时间，过度培养会降低质粒质量甚至导致质粒DNA突变；

　　每次使用时都要注意Buffer S2和S4是否形成沉淀，如有沉淀37℃溶解后再用；

　　质粒的产量跟细菌量、质粒拷贝数、质粒大小和操作规范程度密切相关。