产品及特点
本试剂盒适合于从新鲜或冷冻的动物组织，细胞，血液，细菌等多种样品中提取高纯度总DNA。本品可纯化获得分子量最大为50kb的DNA片段，纯化过程不需要使用苯酚或氯仿等有毒溶剂，无需乙醇沉淀。本试剂盒采用优化的缓冲体系使裂解液中的DNA高效特异的结合到硅基质离心吸附柱上，PCR和其他酶促反应的抑制剂可通过两步洗涤步骤被有效去除，最后使用低盐缓冲液或水洗脱，即可得到高纯度DNA。纯化得到的DNA可以直接用于酶切，PCR，Real-Time PCR，文库构建，Southern Blot，它具有下列特点：
1.简便快速：1小时内可获得高纯度的基因组DNA；
2.质量好：可直接进行PCR、酶切和杂交等分子生物学实验。
成分规格
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产品组成
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MI010403-50
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MI010403-100
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MI010403-200
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Buffer GTL
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12 ml
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25 ml
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50 ml
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Buffer GL
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12 ml
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25 ml
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50 ml
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Buffer W1（concentrate）
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13 ml
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26 ml
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52 ml
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Buffer W2（concentrate）
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15 ml
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30 ml
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60 ml
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Buffer EB
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10 ml
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10 ml
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30 ml
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Proteinase K
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1 ml
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2×1 ml
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4×1 ml
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Spin Column with Collection Tubes
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50套
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100套
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200套
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保存条件
蛋白酶K于-20℃，其他组分室温（15-30℃）。
使用方法
【自备试剂】
无水乙醇
Enzymatic Lysis Buffer（提取革兰氏阳性菌基因组DNA时须准备）。Enzymatic Lysis Buffer配方：20 mM Tris，pH 8.0；2 mM Na2-EDTA；1.2％Triton X-100；终浓度为20mg/ml的Lysozyme（溶菌酶）。
一、血液及细胞样本基因组提取
1.材料处理
1)如果提取材料为哺乳动物抗凝血液（无核红细胞），可直接向50-200μl新鲜或冷冻的抗凝血液样品中加入Buffer GTL补足至200μl。
2)如果提取材料为禽类，鸟类，两栖类或更低级生物的抗凝血液，其红细胞为有核细胞，取5-10μl新鲜或冷冻的抗凝血液样品，加入Buffer GTL补足至200μl。
3)贴壁培养的细胞应先处理为细胞悬液（最大提取量为5x106个细胞），2000 rpm（400g）离心5min，弃尽上清，加200μl GTL，振荡至样品彻底悬浮。
（注意：如需去除RNA，可在上述步骤完成后，加入4μl浓度为100mg/ml的RNase A溶液，涡旋15秒，室温放置2min。）
2.加入20μl Proteinase K溶液,混匀。
3.加入200μl Buffer GL，涡旋振荡充分混匀，56˚C水浴10min。
4.短暂离心以去除管盖内壁的水珠。加入200μl无水乙醇，涡旋振荡充分混匀，短暂离心。
（注意：加入Buffer GL和无水乙醇后要立即涡旋震荡混匀。加入Buffer GL和无水乙醇后可能会产生白色沉淀，不会影响后续实验。一些组织在加入Buffer GL和无水乙醇后可能形成溶胶状产物，此时推荐进行剧烈震荡或涡旋处理。）
5.上一个步骤中所得溶液全部加入到已装入收集管的吸附柱（Spin Columns DM）中，若一次不能加完溶液，可分多次转入。12,000 rpm（约13,400g）离心1min，倒掉收集管中的废液，将吸附柱重新放回收集管中。
6.向吸附柱中加入500μl Buffer W1（使用前检查是否已加入无水乙醇），12,000 rpm离心1min，倒掉收集管中的废液，将吸附柱重新放回收集管中。
7.向吸附柱中加入500μl Buffer W2（使用前检查是否已加入无水乙醇），12,000 rpm离心1min，倒掉收集管中的废液，将吸附柱重新放回收集管中。
（注意：如需进一步提高DNA纯度，可重复步骤7。）
8.12,000 rpm离心2min，倒掉收集管中废液。将吸附柱置于室温数分钟，以彻底晾干。
（注意：这一步的目的是将吸附柱中残余的乙醇去除，乙醇的残留会影响后续的酶切、PCR等酶促反应）。
9.将吸附柱置于一个新的离心管（自备）中，向吸附柱的中间部位悬空加入50-200μl Buffer EB或灭菌水，室温放置2-5min，12000rpm离心1min，收集DNA溶液，-20℃保存DNA。
（注意：为增加洗脱效率，可将洗脱液Buffer EB在60℃预热。如需使用去离子水洗脱，可用NaOH调整其pH值在7.0-8.5之间，为了增加回收率，可将得到的溶液重新加入到吸附柱中，室温放置2 min，再次离心收集）
二、动物组织基因组提取
1.材料处理
如果提取材料为动物组织，取25 mg（脾组织用量应少于10 mg）；如果材料为鼠尾，取一段长度为0.4-0.6 cm的大鼠鼠尾或两段长度为0.4-0.6 cm的小鼠鼠尾。样本进行液氮研磨或切成小块后置于1.5 ml离心管中，加入180μl Buffer GTL，将不同样品做好标记。若使用匀浆器处理样本，匀浆前向样本中加入不超过80μl Buffer GTL，匀浆后加入100μl Buffer GTL。
（注意：1）确保各组织的量不要超出推荐范围。2）组织样本在加入Buffer GTL之前用液氮研磨或加入Buffer GTL用匀浆器匀浆处理，可以增加裂解效率。）
2.加入20μl Proteinase K，涡旋震荡使样品彻底混匀。56℃水浴，直至组织完全裂解，孵育过程中可每隔一段时间颠倒或震荡离心管使样品分散。
（注意：1）不同组织消化时间不同，通常1-3小时即可完成，鼠尾需要消化6-8小时，必要时过夜消化，不会影响后续操作。2）如果孵育和涡旋震荡后仍然有胶状物质，延长56˚C孵育时间或再加入20μl Proteinase K消化。3）如需去除RNA，可在上述步骤完成后，加入4μl的浓度为100mg/ml的RNase A溶液，涡旋15秒，室温放置5-10min。）
3.加入200μl Buffer GL，涡旋震荡充分混匀，70˚C水浴10min。短暂离心后加入200μl无水乙醇，涡旋震荡充分混匀。
（注意：1）加入Buffer GL和无水乙醇后要立即涡旋震荡混匀。
2）加入Buffer GL和无水乙醇后可能会产生白色沉淀，不会影响后续实验。一些组织（如脾，肺）在加入Buffer GL和无水乙醇后可能形成溶胶状产物，此时推荐进行剧烈震荡或涡旋处理。）
4.短暂离心，将步骤3所得溶液全部加入到已装入收集管的吸附柱（Spin Columns DM）中，若一次不能加完溶液，可分多次转入。12,000 rpm（约13,400g）离心1min，倒掉收集管中的废液，将吸附柱重新放回收集管中。
5.向吸附柱中加入500μl Buffer W1（使用前检查是否已加入无水乙醇），12,000 rpm离心1 min，倒掉收集管中的废液，将吸附柱重新放回收集管中。
6.向吸附柱中加入500μl Buffer W2（使用前检查是否已加入无水乙醇），12,000 rpm。离心1min，倒掉收集管中的废液，将吸附柱重新放回收集管中。
（注意：如需进一步提高DNA纯度，可重复步骤6。）
7.12,000 rpm离心2min，倒掉收集管中废液。将吸附柱置于室温数分钟，以彻底晾干。
（注意：这一步的目的是将吸附柱中残余的乙醇去除，乙醇的残留会影响后续的酶切，PCR等酶促反应）。
8.将吸附柱置于一个新的离心管（自备）中，向吸附柱的中间部位悬空加入50-200μl Buffer EB或灭菌水，室温放置2-5min，12,000 rpm离心1min，收集DNA溶液，-20℃保存DNA。
（注意：为增加洗脱效率，可将洗脱液Buffer EB在60℃预热。如需使用去离子水洗脱，可用NaOH调整其pH值在7.0-8.5之间，为了增加回收率，可将得到的溶液重新加入到吸附柱中，室温放置2 min，再次离心收集）
三、细菌基因组提取
1.细菌样本预处理
取1-3 ml过夜培养的菌液，室温10,000 rpm离心1 min，弃上清。
（注意：根据菌液的浓度决定取液量，当OD600=1时，1ml菌液浓度为109个细胞，菌液的量不要超过109个细胞，太多会使离心柱的膜堵塞，提取的基因组DNA的量减少，纯度降低）
2.加入200μl Buffer GTL，用枪头充分吹打或用涡旋振荡器充分悬浮。
（注意：对于较难破壁的革兰氏阳性菌，可略过第2步骤，加入溶菌酶进行破壁处理，具体方法为：加入180µl终浓度为20 mg/ml的溶菌酶缓冲液(20 mM Tris,pH 8.0；2 mM Na2-EDTA；1.2%Triton X-100；溶菌酶必须用溶菌酶干粉溶解在缓冲液中进行配制，否则会导致溶菌酶无活性)，37℃处理30 min以上。如要去除RNA，可加入浓度为100 mg/ml的RNase A 4μl，室温处理5 min）
3.加入20μl Proteinase K溶液，充分混匀。
4.加入200μl Buffer GL，充分混匀，56℃水浴10 min，孵育过程中每隔一段时间颠倒或震荡离心管使样本分散均匀。溶液变得清亮后短暂离心，以去除管盖内壁的水珠。
（注意：Buffer GL加入时可能会产生白色沉淀，一般56℃时会消失，不影响后续实验，如溶液未变清亮，说明细胞裂解不彻底，可能导致提取的DNA量少或者提取的DNA不纯）
5.加入200μl无水乙醇，充分震荡，此时可能会出现絮状沉淀，短暂离心以去除管盖内壁水珠。
6.将一个离心吸附柱放入收集管中，将上一步所得溶液和絮状沉淀转移到吸附柱中，12,000 rpm离心1 min，弃收集管中的滤液。
7.向吸附柱中加入500μl Buffer W1（使用前检查是否已加入无水乙醇），12,000 rpm离心1min，倒掉收集管中的废液，将吸附柱重新放回收集管中。
8.向吸附柱中加入500μl Buffer W2（使用前检查是否已加入无水乙醇），12,000 rpm。离心1min，倒掉收集管中的废液，将吸附柱重新放回收集管中。
（注意：如需进一步提高DNA纯度，可重复步骤6。）
9.12,000 rpm离心2min，倒掉收集管中废液。将吸附柱置于室温数分钟，以彻底晾干。
（注意：这一步的目的是将吸附柱中残余的乙醇去除，乙醇的残留会影响后续的酶切、PCR等酶促反应）。
10.将离心吸附柱置于一个新的1.5 ml塑料离心管（自备）中，加入50-100μl Buffer EB，室温放置2 min，12,000 rpm离心1 min，离心管底溶液即基因组DNA。
（注意：为增加洗脱效率，可将洗脱液Buffer EB在60℃预热。如需使用去离子水洗脱，可用NaOH调整其pH值在7.0-8.5之间，为了增加回收率，可将得到的溶液重新加入到吸附柱中，室温放置2 min，再次离心收集）
注意事项
如Buffer GTL和Buffer GL产生沉淀，可在56℃水浴溶解；
样品应避免反复冻融，否则会导致提取的DNA片段小，提取量下降；
所有离心步骤均为台式离心机，室温下操作；
按要求在Buffer W1和Buffer W2中加入无水乙醇。
