Bradford 法蛋白定量是基于考马斯亮蓝G-250与蛋白质结合后， 产生蓝色化合物，反应迅速而稳定。反应化合物在465-595nm处有最大的光吸收值，化合物颜色的深浅与蛋白浓度的高低成正比关系，因此可通过检测595nm的光吸收值的大小来计算蛋白的含量。

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产品简介：

Bradford 法蛋白定量是基于考马斯亮蓝G-250与蛋白质结合后， 产生蓝色化合物，反应迅速而稳定。反应化合物在465-595nm处有最大的光吸收值，化合物颜色的深浅与蛋白浓度的高低成正比关系，因此可通过检测595nm的光吸收值的大小来计算蛋白的含量。

保存条件：

Bradford试剂A 2-8°C保存，蛋白标准品-20°C保存，一年内有效。

操作流程：

方案一、试管检测

1、试剂准备

1.1 取适量5mg/ml蛋白标准，PBS稀释至终浓度为2mg/ml蛋白标准。配制后可立即使用，也可以-20°C长期保存.

1.2 稀释BSA标准品：用与待测蛋白样品相一致的稀释液按下表稀释BSA标准品。

表1：BSA标准品配制表

1.3取干净的试管，将30μl稀释好的BSA标准品分别加到作好标记的试管中。

1.4取干净的试管，分别加入30μl待测蛋白样品(原液或稀释液)，并作好标记，推荐每个样品做2-3 个平行反应。

2、样品孵育及检测

2.1向上一步骤配制的不同浓度的标准品BSA和待测样品试管中各加入1.5ml Bradford蛋白定量试剂，充分混匀，室温放置10分钟。

2.2用分光光度计测定595nm 处的吸光值。

3、制作标准曲线和计算样品浓度

3.1利用Excel或其他软件绘制标准曲线，并计算样品中的蛋白浓度。

3.2如果所得到的蛋白浓度不在检测范围内，请重新稀释样品后再次测定。

方案二、微孔检测

1、试剂准备

1.1将按表2稀释好的BSA标准品和待测蛋白样品（原液或稀释液）各5μl分别加到作好标记的96孔板微孔中。推荐每个样品做2-3 个平行反应。

表2：BSA标准品配制表

2、样品孵育及检测

2.1每孔加入250μl Bradford蛋白定量试剂，充分混匀，盖上96孔板盖，室温放置10 分钟。

2.2用酶标仪测定595nm处的吸光值。

3、制作标准曲线和计算样品浓度

3.1绘制标准曲线，计算样品中的蛋白浓度。

3.2如果所得到的蛋白浓度不在检测范围内，请重新稀释样品后再次测定。

注意事项:

1、样品中若含有去垢剂会影响检测结果，请试用 BCA 蛋白浓度测定试剂盒；

2、要得到更为精确的蛋白浓度结果，每个蛋白梯度和样品均需做复孔, 每次均应做标准曲线；

3、需准备 37°C水浴或温箱、酶标仪或普通分光光度计，测定波长为 465-595nm 之间，595nm最佳。酶标仪需与 96孔酶标板配套使用。使用分光光度计测定蛋白浓度时，试剂盒测定的样品数量会因此而减少。使用温箱孵育时，应注意防止因水份蒸发影响检测结果。

4、为了您的安全和健康，请穿实验服并戴一次性手套操作。

温馨提示

为了您的自身安全，使用试剂前，请做好防护，如穿实验服，带手套等。