革兰氏染色法是细菌学中广泛使用的一种鉴定染色法，媒染剂碘液进入菌体后与结晶紫结合，革兰氏阳性菌对碘与结晶紫摄取量多且牢固，不易被酒精脱色。革兰氏阴性菌对碘与结晶紫摄取量少，不牢固，易被酒精脱色。为观察方便，脱色后再用一种红色染料，如碱性番红进行复染。阳性菌仍为紫色，阴性菌则被染为红色。

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产品简介：

革兰氏染色法是细菌学中广泛使用的一种鉴定染色法，媒染剂碘液进入菌体后与结晶紫结合，革兰氏阳性菌对碘与结晶紫摄取量多且牢固，不易被酒精脱色。革兰氏阴性菌对碘与结晶紫摄取量少，不牢固，易被酒精脱色。为观察方便，脱色后再用一种红色染料，如碱性番红进行复染。阳性菌仍为紫色，阴性菌则被染为红色。

保存条件：

室温避光保存，一年内有效。

实验操作：

1 准备

1.1 使用无菌接种环，挑取一薄层样品置于载玻片上并涂片；

接种环通过酒精灯火焰灼伤而达到无菌，使用前可以冷却30秒；

如果检测的组织样品可能被细菌污染，或者在培养基中有细菌生长，可直接用接种环挑取样品并置于载玻片上。如果检测培养板上生长的细菌克隆，可现在载玻片上滴加一滴无菌水，然后挑取一个克隆，并将其置于水中。

1.2 使涂片自然干燥，热固定，在酒精灯的火焰上略过2~3次；

注意：不要将载玻片持续置于火焰上，以免样品过热。

2 染色

2.1 将热固定后的载玻片置于装有草酸铵结晶紫染液的染缸中，使载玻片在染缸中站立1min；

2.2 使用自来水轻轻的洗载玻片5sec，抖掉多余的水；

2.3 将载玻片置于装有革兰氏碘液的染缸中1min，水洗，并抖掉多余的水；

3 脱色和复染

3.1 略微倾斜载玻片，将脱色液滴加在载片上端，使其下滑通过样品区，直至紫色出现为止。重要的是，脱色既不能过度也不能不足。如果脱色过度，可将革兰氏阳性菌误判为阴性菌；如果脱色不足，可将革兰氏阴性菌误判为阳性菌。

3.2 水洗5sec，抖掉多余的水分；

3.3 使用番红复染液染色1min；

3.4 水洗5秒，抖掉多余的水分。允许其自然干燥，或者用吸水纸小心的将水分吸干。

4 镜检

4.1 在油镜(900×~1000×)下观察细菌以区分革兰氏阳性菌和阴性菌。

不要使用盖玻片，在载玻片中间加一滴油观察细菌。如果需要，载玻片可保存于载片盒中数月再观察。

染色结果：

革兰氏阳性菌染为蓝紫色，革兰氏阴性菌染为红色。

注意事项：

1 革兰氏染色的关键在于严格掌握酒精的脱色程度，如脱色过度，阳性菌可被误染为阴性菌；而脱色不够时，阴性菌可被误染为阳性菌。此外，菌龄也影响染色结果，如阳性菌培养时间过长，或已死亡及部分菌自行溶解，都常呈阴性反应。

2 标本涂片不能太厚。

3 玻片通过火焰温度不能过高。

4 若涂片较厚，延长脱色时间，直至不再出现紫色为止。

5 碘液变透明，则不能使用。

6 水洗时动作用轻柔，沿载玻片对角线方向用洗瓶冲洗，以免把菌体冲掉。

7 第一次使用本试剂盒时建议先取1~2个样品做预实验。

温馨提示：

为了您的自身安全，使用试剂前，请做好防护，如穿实验服，带手套等。