细胞表面有完整的抗原或受体，先用已知未标记的一抗与待检测的抗原反应。

• 细胞表面有完整的抗原或受体，先用已知未标记的一抗与待检测的抗原反应。反应一定时间后，洗去未结合的抗体。再与荧光素标记的二抗反应。根据所测定的荧光强度和阳性百分率可以得到相应抗原的密度和分布的比例。

  1. 间接免疫荧光染色法的试剂和材料

  （1）一抗以及荧光素标记的二抗、同型对照抗体，如果没有同型对照抗体，可以用荧光素标记的二抗代替同型对照抗体。

  （2）细胞洗液。含2%BSA、0.2%NaN3的PBS，固定液（1%多聚甲醛PBS液，pH7.2）。

  （3）流式专用样品管、离心机、玻璃管。

  （4）流式细胞仪（本实验室为BD Aria）。

  2. 间接免疫荧光染色法的实验操作步骤

  （1）取3只流式专用样品管分别标记为空白管、同型对照管、样品管。将100l的细胞悬液加入流式管中（细胞悬液的浓度为1×106l-1）。

  （2）在空白管中加入荧光素标记的二抗，在同型对照管中加一抗的同型对照抗体，在样品管中加入一抗，混匀（试剂的用量根据试剂说明书）。

  （3）4℃避光孵育30min，加入细胞洗液2ml，1000r/min离心5min，反复洗涤2次，弃上清。在空白管中加入固定液0.5ml，在同型对照管中加入固定液0.5ml，检测时空白管和同型对照管当作对照。

  （4）在样品管中加入荧光素标记的二抗作为样品管，混匀（试剂的用量根据试剂说明书）。

  （5）4℃避光孵育30min，加入细胞洗液2ml，1000r/min离心10min，反复洗涤2次。

  （6）弃上清，加入固定液0.5ml，混匀。

  （7）上流式细胞仪器检测与分析。