直接免疫荧光染色法是荧光染色最简单、最基本的方法。

• 直接免疫荧光染色法是荧光染色最简单、最基本的方法。通过细胞膜表面或胞内的抗原分子与相应的荧光抗体进行反应，形成带有荧光的抗原抗体复合物。经激光激发后发出与荧光抗体相对应的特定波长的荧光，其荧光强度与被检测抗原分子表达密度成正比例关系，由此可以检测出细胞与标记抗体对应抗原的表达量和阳性细胞的百分比。

  1. 直接免疫荧光染色法的试剂及材料

  （1）荧光标记的特异性单克隆抗体及同型对照抗体。

  （2）细胞洗液。含2%BSA、0.2%NaN3的PBS，固定液（1%多聚甲醛PBS液，pH7.2）。

  （3）流式专用样品管、离心机、玻璃管。

  （4）流式细胞仪（本实验室为BD Aria）。

  2. 直接免疫荧光染色法的实验操作步骤

  （1）取两支流式专用样品管分别标记为同型对照管和样品管。将100l的细胞悬液加入流式专用样品管中（细胞悬液的浓度为1×106l-1）。

  （2）在同型对照管中加入荧光素标记同型对照抗体作为同型对照，在样品管中加入荧光素标记抗体作为样品管，混匀。（试剂的用量根据试剂说明书）

  （3）4℃避光孵育30min，加入细胞洗液2ml，1000r/min离心5min，反复洗涤2次。

  （4）弃上清，加入固定液500l，混匀。

  （5）上流式细胞仪检测与分析。